[摘要] 目的 評(píng)價(jià)含膠原纖維不同的膠原海綿促進(jìn)創(chuàng)面肉芽生長與愈合的療效比較。 方法 將含膠原纖維較多的可即邦膠原海綿與較少的艾微停微纖維止血膠原海綿分別作為治療組1與治療組2，與對(duì)照組凡士林紗布比較，外用于兔背部機(jī)械性創(chuàng)面，于用藥后3、7、14 d分別測(cè)定創(chuàng)面面積愈合率、肉芽毛細(xì)血管密度、肉芽內(nèi)血紅蛋白含量及羥脯氨酸含量，并記錄各組瘡面愈合時(shí)間。結(jié)果 創(chuàng)面愈合率及愈合時(shí)間，治療組明顯優(yōu)于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.01），其中第7天時(shí)創(chuàng)面愈合率及創(chuàng)面愈合時(shí)間，治療組1優(yōu)于治療組2；創(chuàng)面肉芽毛細(xì)血管密度與血紅蛋白含量，治療組優(yōu)于對(duì)照組（P ＜ 0.01），第7天時(shí)，治療組1優(yōu)于治療組2，與創(chuàng)面愈合率一致；創(chuàng)面肉芽羥脯氨酸含量結(jié)果與創(chuàng)面愈合率一致，不同的是第14天時(shí)，治療組1優(yōu)于治療組2。 結(jié)論 膠原海綿對(duì)創(chuàng)面具有促進(jìn)愈合的療效，作用機(jī)制之一是促進(jìn)血管新生與膠原合成。含膠原纖維較高的可即邦膠原海綿更有利于創(chuàng)面愈合。
中國論文網(wǎng) http://www.xzbu.com/6/view-1680974.htm
[關(guān)鍵詞] 膠原；肉芽；血管新生；羥脯氨酸；創(chuàng)面愈合
[中圖分類號(hào)] R332 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2012）04（a）-0026-03
The experimental research of improving the growth of granulation and wound healing with collagen sponges
MIAO Xuehua1 ZHOU Yong1 REN Weiye2 SHAO Dawei1 CHEN Yun1 ZHANG Jing1 LI Cheng1 YAO Chang1
1. Jiangsu Provincial Hospital of TCM, Nanjing 210029, China; 2. Wuxi Beidi Bioengineering Ltd in Jiangsu Province,Wuxi 214092, China
[Abstract] Objective To assess the effects of improving he growth of granulation and wound healing with two kinds of collagen shponges which contain low and high amounts of collagen fibers. Methods To apply the collagen sponge which contains high amount of collagen fibers named Kejibang collagen sponge as experiment group1, compared with the one of low amount fibers named Aiweiting collagen sponge as experiment group 2 and the one of kpetrolatum gauze as control group to the mechanical wound after model finished and changed them at day 3, day 7, day 14 with sample taken at the same time. 10 samples of each group for evaluation of the rates of woud healing, the densities of capillaries, the contents of hemoglobin and hydroxyproline. The date of wound healing was also recorded. Results The rates and date of wound healing as well as the densities of capillaries, the contents of hemoglobin and hydroxyproline were improved by experiment groups with statistical differences (P ＜ 0.01), among which, the experinetal group 1 got better effects at day 7 of the rates and date of wound healing as well as the densities of capillaries, the contents of hemoglobin and day 14 of the contents of hydroxyproline than the results of experiment group 2 with statistical differences(P ＜ 0.01). Conclusion Collagen sponges are able to improving woud healing with one of the mechanisms as promoting angiogenesis and collagen synthesis. The Kejibang collagen sponge with high contents of collagen fibers may get the better results as compared of Aiweitin collagen with low contents of collagen fibers.
[Key words] Collagen; Granulation; Angiogenesis; Hydroxyproline; Wound healing
膠原，是生物體各種結(jié)締組織的主要組成分。具有促進(jìn)組織愈合、可體內(nèi)降解，而且降解碎片具有組織相容性的特性，已成為組織工程中應(yīng)用最廣的生物材料[1]。膠原經(jīng)過修飾后可以提高組織相容性及促進(jìn)血管生成[2]，本研究采用無錫貝迪生物工程有限公司作為治療組1，該膠原去除了膠原多肽鏈末端的氨基團(tuán)，具有較好的組織相容性，且柔軟延展性較好；以巴德醫(yī)療器械（北京）有限公司生產(chǎn)的艾微停微纖維止血膠原作為治療組2，該膠原纖維纖細(xì)，有利機(jī)體止血，評(píng)價(jià)膠原海綿的對(duì)組織肉芽生長與創(chuàng)面愈合的影響。
1材料與方法
1.1動(dòng)物造模與分組
造模：健康新西蘭白兔10只（南京農(nóng)業(yè)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），雄性，體重200~250 g，，術(shù)前24 h斷食不斷水。麻醉成功后，剔除兔背部區(qū)域的毛15 cm×20 cm，用外科剪在兔背面脊柱旁開約2 cm處制造直徑為3 cm大小開放性全層皮膚缺損圓形創(chuàng)面，至肌筋膜深層，左側(cè)1個(gè)，右側(cè)2個(gè)，上下創(chuàng)口之間相距4 cm，止血。
分組：左側(cè)為對(duì)照組，予以凡士林油紗布覆蓋，右側(cè)上方創(chuàng)面以5 cm×5 cm×0.5 cm的可即邦膠原海綿覆蓋，記為治療組1；下方創(chuàng)面以同樣大小的艾微停微纖維止血膠原覆蓋，記為治療組2；各組覆蓋后，再以無菌紗布覆蓋固定與周圍皮膚。造模后3、7、14 d 3個(gè)時(shí)相點(diǎn)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物創(chuàng)面進(jìn)行照相與取材。
1.2 測(cè)試指標(biāo)及方法
1.2.1 創(chuàng)面面積愈合率（%）：通過數(shù)碼相機(jī)行平行于創(chuàng)面照相，造模時(shí)及造模后3、7、14 d 3個(gè)時(shí)相點(diǎn)以image J軟件測(cè)定計(jì)算攝片的創(chuàng)面面積測(cè)試出取材時(shí)創(chuàng)面面積[3]，創(chuàng)面面積愈合率（%）=（造模時(shí)創(chuàng)面面積-取材時(shí)創(chuàng)面面積）/造模時(shí)創(chuàng)面面積×100。并記錄創(chuàng)面愈合的時(shí)間（d）。
1.2.2創(chuàng)面毛細(xì)血管密度測(cè)定：造模后3、7、14 d 3個(gè)時(shí)相點(diǎn)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行創(chuàng)面邊緣至創(chuàng)面中心的寬1 cm修復(fù)組織，固定后行HE染色用普通光鏡觀察，在400倍數(shù)下，各組標(biāo)本任取3個(gè)視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野內(nèi)毛細(xì)血管的數(shù)目，取均值作為創(chuàng)面毛細(xì)血管密度。
1.2.3肉芽內(nèi)血紅蛋白含量：取血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)品作血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，創(chuàng)面肉芽取出稱重后，加入2 mL0.9%氯化鈉溶液，震蕩20 min洗出肉芽內(nèi)血液,以分光光度儀測(cè)定其510 nm吸收峰值，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照后測(cè)出血紅蛋白含量。
1.2.4 羥脯氨酸含量：將創(chuàng)面肉芽取出稱重后，予以勻漿后離心，加入試劑后，測(cè)試方法同血紅蛋白含量，以分光光度儀測(cè)定其550 nm吸收峰值。
1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，率的檢驗(yàn)采取χ2檢驗(yàn)；檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
2 結(jié)果
2.1兔背部機(jī)械性創(chuàng)面愈合率
創(chuàng)面愈合率：造模后3、7、14 d各組創(chuàng)面面積均明顯減小；造模后第3天，可即邦膠原、艾薇停微纖維止血膠原組較凡士林紗布組創(chuàng)面愈合率提高1倍左右；之后創(chuàng)面愈合速度均有所減緩，但實(shí)驗(yàn)各組仍然顯著高于對(duì)照組（P ＜ 0. 01），可即邦膠原海綿又顯著高于其他兩組（P ＜ 0. 05），第14天時(shí)，可即邦膠原海綿創(chuàng)面愈合率達(dá)78%，而艾薇停微纖維止血膠原為74%，對(duì)照組僅為66%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。創(chuàng)面愈合時(shí)間，可即邦膠原平均為17.7 d，比艾薇停微纖維止血膠原提前1 d，比對(duì)照組提前近5 d。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。
2.2 兔背部機(jī)械性創(chuàng)面毛細(xì)血管密度
兔背部創(chuàng)面覆蓋膠原海綿，創(chuàng)面出血量少，很快形成一層凝血膜，于3、7、14 d分別創(chuàng)面中心的肉芽組織，HE染色，血管計(jì)數(shù)，未取材之創(chuàng)面予以更換輔料及膠原海綿。結(jié)果顯示創(chuàng)面毛細(xì)血管密度于7 d時(shí)達(dá)頂峰，之后下降。治療組1與治療組2顯著高于對(duì)照組。在3 d與7 d時(shí)療效顯著，較對(duì)照組多50%~80%，14 d時(shí)仍有差異，但已下降到20%左右。在7 d時(shí)，治療組1高于治療組2，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。具體見表2。
2.3兔背部機(jī)械性創(chuàng)面愈合肉芽中血紅蛋白含量
造模后3、7、14 d各實(shí)驗(yàn)組血紅蛋白含量均顯著高于對(duì)照組（P ＜ 0.01）；實(shí)驗(yàn)各組中，造模后3、7 d時(shí)，可即邦膠原海綿組明顯高于艾薇停微纖維止血膠原組，而造模后14 d時(shí)，治療組則高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。
2.4 兔背部機(jī)械性創(chuàng)面愈合肉芽中羥脯氨酸含量
造模后3 ｄ起，各組造模后肉芽組織內(nèi)羥脯氨酸含量開始升高，至14 ｄ時(shí)達(dá)到頂峰，說明機(jī)體創(chuàng)面肉芽生長，膠原合成。第3天，膠原海綿組相對(duì)對(duì)照組肉芽組織內(nèi)羥脯氨酸含量顯著提高（P = 0. 05及0. 004），治療組之間無明顯差別，造模后第7及14天，各治療組均極顯著高于對(duì)照組，對(duì)照組14 ｄ時(shí)相當(dāng)于治療組7 ｄ時(shí)的含量；14 ｄ時(shí)，可即邦膠原海綿高于艾薇停微纖維止血膠原海綿組（P = 0. 014），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表4。
3 討論
膠原是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分，應(yīng)用于創(chuàng)面，組織相容性好、同時(shí)直接提供創(chuàng)面營養(yǎng)。臨床與實(shí)驗(yàn)研究表明，膠原海綿局部外用于創(chuàng)面，具有促進(jìn)創(chuàng)面愈合、美容與肉芽生長的療效[4-5]。然而有關(guān)含不同密度膠原蛋白的膠原對(duì)創(chuàng)面愈合影響的實(shí)驗(yàn)研究尚未見報(bào)道。本研究首先從血管新生與膠原合成方面探查膠原海綿外用對(duì)創(chuàng)面的愈合作用，同時(shí)比較膠原海綿中膠原蛋白的含量差異對(duì)創(chuàng)面愈合的影響。
創(chuàng)面愈合率及愈合時(shí)間是創(chuàng)面愈合的金標(biāo)準(zhǔn)。本研究結(jié)果顯示膠原海綿可以顯著提高創(chuàng)面愈合率及縮短愈合時(shí)間，劉艷明等[6]研究采用的膠原海綿治療燒傷創(chuàng)面，膠原海綿2周時(shí)愈合率為24%，對(duì)照組凡士林紗布為10%，與本文采用機(jī)械性創(chuàng)面治療后3 ｄ時(shí)的結(jié)果一致，可能是機(jī)械性創(chuàng)面去除了燒傷創(chuàng)面炎癥與壞死等因素；治療組在創(chuàng)面愈合率及愈合時(shí)間方面均顯著優(yōu)于對(duì)照組，本研究結(jié)果與其一致。組織的修復(fù)要經(jīng)歷炎癥、增殖、塑形三個(gè)階段，其中增殖階段包括血管新生與膠原合成，本研究顯示膠原海綿提高創(chuàng)面肉芽血管新生與膠原合成顯著促進(jìn)創(chuàng)面肉芽增殖，筆者前期研究也發(fā)現(xiàn)膠原能促進(jìn)血管新生[7]。
本研究進(jìn)一步評(píng)價(jià)含膠原纖維較多的可即邦膠原海綿與含膠原纖維較少的艾微停微纖維止血膠原對(duì)創(chuàng)面愈合的療效，相同體積兩種膠原的重量分別為5 g與0.5 g，相差10倍。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)可即邦膠原海綿在7 d時(shí)的創(chuàng)面愈合率與總的愈合時(shí)間優(yōu)于艾微停微纖維止血膠原，同時(shí)7 d時(shí)的血管新生及血紅蛋白含量與14 d時(shí)羥脯氨酸含量高于艾微停微纖維止血膠原，顯示出膠原纖維含量較多可能對(duì)創(chuàng)面愈合有利。筆者認(rèn)為首先是因?yàn)楹z原較多的海綿降解時(shí)，可以有大量的膠原氨基酸釋放至創(chuàng)面，而氨基酸對(duì)創(chuàng)傷組織和細(xì)胞再生提供了必要的良好條件[4]；此外，研究顯示生物材料中孔徑大小與血管新生密切相關(guān)[8]，筆者推測(cè)可即邦膠原海綿的孔徑可能更有利于血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖與遷移。
總之，本研究顯示出膠原海綿對(duì)創(chuàng)面具有促進(jìn)愈合的療效，作用機(jī)制之一是促進(jìn)血管新生與膠原合成。含膠原纖維較高的可即邦膠原海綿更有利于創(chuàng)面愈合，而含膠原纖維較少的艾薇停微纖維止血膠原海綿對(duì)創(chuàng)面愈合沒有止血療效有優(yōu)勢(shì)。今后進(jìn)一步探查膠原纖維含量對(duì)創(chuàng)面愈合的影響可能開發(fā)出療效更佳的膠原海綿產(chǎn)品。
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